某一质粒载体如图6所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述三种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是____;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____的固体培养基。(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自____。
某一质粒载体如图6所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活
(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:
(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述三种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是____;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____的固体培养基。
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自____。
(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:

(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述三种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是____;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____的固体培养基。
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自____。
参考解析
解析:(1)能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点(答出两点即可) (2)二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长:二者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长;四环素
(3)受体细胞
解析:(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有:能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等。
(2)依题意可知,目的基因插入位点在Tetr中,导致四环素抗性基因(TEtr)失活,而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)仍能行使正常功能。如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞,因二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长,所以是不能区分的;含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞,因二者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都能生长,因此也是不能区分的。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基;因目的基因插入后,导致四环素抗性基因失活,含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌在该培养基中不能生长,而含有质粒载体的则能正常生长。
(3)噬菌体是专性在细菌细胞中寄生的细菌病毒。在侵染细菌时,噬菌体的DNA进入到细菌细胞中,而其蛋白质外壳留在细胞外;在噬菌体DNA的指导下,利用细菌细胞中的物质和能量合成噬菌体的组成成分。其DNA复制所需的原料来自宿主(受体)细胞,即大肠杆菌。
(3)受体细胞
解析:(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有:能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等。
(2)依题意可知,目的基因插入位点在Tetr中,导致四环素抗性基因(TEtr)失活,而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)仍能行使正常功能。如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞,因二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长,所以是不能区分的;含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞,因二者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都能生长,因此也是不能区分的。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基;因目的基因插入后,导致四环素抗性基因失活,含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌在该培养基中不能生长,而含有质粒载体的则能正常生长。
(3)噬菌体是专性在细菌细胞中寄生的细菌病毒。在侵染细菌时,噬菌体的DNA进入到细菌细胞中,而其蛋白质外壳留在细胞外;在噬菌体DNA的指导下,利用细菌细胞中的物质和能量合成噬菌体的组成成分。其DNA复制所需的原料来自宿主(受体)细胞,即大肠杆菌。
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载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。载体必须具备的特性中不包括A、具备自我复制的能力,有较高的拷贝数B、载体必须具有一个或多个筛选标志C、能容纳外源性的DNA分子D、具备一个或多个限制性内切酶的单一识别和切割点E、必须能够表达外源基因人工构建的含有噬菌体DNA cos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为A、黏粒载体B、人工染色体C、质粒载体D、噬菌体载体E、病毒载体
关于转基因操作的过程,正确的顺序是:() ①目的基因插入Ti质粒的T-DNA中 ②农杆菌侵染植物伤口并进入细胞 ③重组质粒导入到农杆菌,T-DNA插入植物基因组中 ④遗传特性在受体植物中表达 A、①②④③B、①②③④C、①③④②D、①③②④
载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。人工构建的含有噬菌体DNAcos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为()A、黏粒载体B、人工染色体C、质粒载体D、噬菌体载体E、病毒载体
下列有关基因工程中载体的说法正确的是()A、质粒是一种独立于细菌拟核外的链状DNA分子B、所有的质粒都可以作为基因工程中的载体C、质粒载体的复制和表达不遵循中心法则D、作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因
下列有关基因工程中运载体的说法,正确的是()A、在进行基因工程的操作中,作为运载体的质粒都是天然质粒B、所有的质粒都可以作为基因工程中的运载体C、质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA分子D、作为运载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA分子进行鉴定和选择的标记基因
将一段外源DNA插入到PBR322的BamHI位点,转化后,阳性重组体的筛选标记是()。A、氨苄青毒素抗性(Ampr)和四环素抗性(Tetr)B、Ampr,TetsC、Amps,TetrD、Amps,Tets
关于多克隆位点描述不正确的是()。A、用于插入外源基因的多种DNA限制性内切酶作用位点B、该位点既可位于抗性基因区域外,也可位于抗性基因区域内C、仅位于质粒载体中D、可能位于标记基因的区域内
问答题在细菌质粒 pBPI的四环素抗性基因 tetR的中间有一个 HindⅡ的切点。用 Hind Ⅲ切割果蝇基因组 DNA,以 pBPl 为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆 15 带有果蝇的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV对克隆 15 进行了酶切分析,电泳结果如图 15.1(用酶切的 pBPl质粒 DNA作对照),旁边标出了片段的大小。 如果用克隆在另一个与pBPl完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针进行Southern印迹杂交,预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?
单选题将一段外源DNA插入到PBR322的BamHI位点,转化后,阳性重组体的筛选标记是()。A氨苄青毒素抗性(Ampr)和四环素抗性(Tetr)BAmpr,TetsCAmps,TetrDAmps,Tets
单选题关于转基因操作的过程,正确的顺序是:() ①目的基因插入Ti质粒的T-DNA中 ②农杆菌侵染植物伤口并进入细胞 ③重组质粒导入到农杆菌,T-DNA插入植物基因组中 ④遗传特性在受体植物中表达A①②④③B①②③④C①③④②D①③②④
单选题载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。人工构建的含有噬菌体DNAcos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为()A黏粒载体B人工染色体C质粒载体D噬菌体载体E病毒载体
问答题某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型,在Kan抗性基因内有一BglI的切点。现用BglI切割该载体进行基因克隆,问:(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?
单选题下列关于质粒pBR322DNA的叙述哪一个是错误的?()A它的分子量较小,易于进入细胞B含有抗四环素(TetR)和抗氨苄青霉素(AmpR)的基因C若用EcoRI切割该质粒,不破坏它的两个抗生素抗性基因D用BamHI限制酶切割pBR322质粒,将破坏它的抗氨苄青霉素基因