某一质粒载体如图6所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述三种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是____;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____的固体培养基。(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自____。

某一质粒载体如图6所示,外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活
(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因,Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamH I酶切后,与用BamH I酶切获得的目的基因混合,加入DNA连接酶进行连接反应,用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化,有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种,分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题:

(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有____(答出两点即可)。而作为基因表达载体,除满足上述基本条件外,还需具有启动子和终止子。
(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述三种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的,其原因是____;并且含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞也是不能区分的,其原因是____。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有____的固体培养基。
(3)基因工程中,某些噬菌体经改造后可以作为载体,其DNA复制所需的原料来自____。


参考解析

解析:(1)能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点(答出两点即可) (2)二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长:二者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上均能生长;四环素
(3)受体细胞
解析:(1)质粒载体作为基因工程的工具,应具备的基本条件有:能够自我复制、具有标记基因、具有一个至多个限制酶切割位点等。
(2)依题意可知,目的基因插入位点在Tetr中,导致四环素抗性基因(TEtr)失活,而氨苄青霉素抗性基因(Ampr)仍能行使正常功能。如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选,在上述四种大肠杆菌细胞中,未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞,因二者均不含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都不能生长,所以是不能区分的;含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的细胞,因二者都含氨苄青霉素抗性基因,在该培养基上都能生长,因此也是不能区分的。在上述筛选的基础上,若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落,还需使用含有四环素的固体培养基;因目的基因插入后,导致四环素抗性基因失活,含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌在该培养基中不能生长,而含有质粒载体的则能正常生长。
(3)噬菌体是专性在细菌细胞中寄生的细菌病毒。在侵染细菌时,噬菌体的DNA进入到细菌细胞中,而其蛋白质外壳留在细胞外;在噬菌体DNA的指导下,利用细菌细胞中的物质和能量合成噬菌体的组成成分。其DNA复制所需的原料来自宿主(受体)细胞,即大肠杆菌。

相关考题:

载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。载体必须具备的特性中不包括A、具备自我复制的能力,有较高的拷贝数B、载体必须具有一个或多个筛选标志C、能容纳外源性的DNA分子D、具备一个或多个限制性内切酶的单一识别和切割点E、必须能够表达外源基因人工构建的含有噬菌体DNA cos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为A、黏粒载体B、人工染色体C、质粒载体D、噬菌体载体E、病毒载体

有关pUC质粒的组成部分中,错误的是 ( )A、与pBR322质粒载体具有相同的复制起始位点B、含有Ampr基因C、具有lacZ基因D、具有多克隆位点E、含有TaqDNA聚合酶

1973年,美国科学家科恩将外源基因插入质粒载体,并导入到大肠杆菌细胞中,首次取得了基因转移的成功。( )

基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因,这是为了便于A.外源基因插入质粒B.宿主菌的生物繁殖C.质粒的转化D.带有目的基因的宿主菌的筛选E.目的基因的表达

关于转基因操作的过程,正确的顺序是:() ①目的基因插入Ti质粒的T-DNA中  ②农杆菌侵染植物伤口并进入细胞  ③重组质粒导入到农杆菌,T-DNA插入植物基因组中  ④遗传特性在受体植物中表达 A、①②④③B、①②③④C、①③④②D、①③②④

载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。人工构建的含有噬菌体DNAcos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为()A、黏粒载体B、人工染色体C、质粒载体D、噬菌体载体E、病毒载体

相对载体而言,插入的DNA片段称为()。A、筛选基因B、可调节基因C、外源DNAD、Cdna

下列有关基因工程中载体的说法正确的是()A、质粒是一种独立于细菌拟核外的链状DNA分子B、所有的质粒都可以作为基因工程中的载体C、质粒载体的复制和表达不遵循中心法则D、作为载体的质粒常含有抗生素抗性基因

下列有关基因工程中运载体的说法,正确的是()A、在进行基因工程的操作中,作为运载体的质粒都是天然质粒B、所有的质粒都可以作为基因工程中的运载体C、质粒是一种独立于细菌染色体外的链状DNA分子D、作为运载体的质粒DNA分子上应有对重组DNA分子进行鉴定和选择的标记基因

将DNA插入人细胞的基因组中的适合的载体是()。A、T质粒B、噬菌体C、反转录病毒D、所有上述各项

将一段外源DNA插入到PBR322的BamHI位点,转化后,阳性重组体的筛选标记是()。A、氨苄青毒素抗性(Ampr)和四环素抗性(Tetr)B、Ampr,TetsC、Amps,TetrD、Amps,Tets

在基因克隆中常用的载体有质粒、柯斯质粒等4种,按载体所能克隆的外源DNA片段的大小,其从大到小的顺序是()、()、()、()。

pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件()A、AmPr和TetrB、ori复制子C、LacZ标记D、多克隆位点

基因敲除是指通过()定向的将外源基因插入宿主细胞染色体DNA,从而使特定的基因在细胞内或生物活体内失活的过程。

关于多克隆位点描述不正确的是()。A、用于插入外源基因的多种DNA限制性内切酶作用位点B、该位点既可位于抗性基因区域外,也可位于抗性基因区域内C、仅位于质粒载体中D、可能位于标记基因的区域内

基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因,这是为了便于()A、外源基因插入质粒B、宿主菌的生物繁殖C、质粒的转化D、带有目的基因的宿主菌的筛选E、目的基因的表达

填空题基因敲除是指通过()定向的将外源基因插入宿主细胞染色体DNA,从而使特定的基因在细胞内或生物活体内失活的过程。

问答题在细菌质粒 pBPI的四环素抗性基因 tetR的中间有一个 HindⅡ的切点。用 Hind Ⅲ切割果蝇基因组 DNA,以 pBPl 为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆 15 带有果蝇的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV对克隆 15 进行了酶切分析,电泳结果如图 15.1(用酶切的 pBPl质粒 DNA作对照),旁边标出了片段的大小。 如果用克隆在另一个与pBPl完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针进行Southern印迹杂交,预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?

单选题基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因,这是为了便于()A外源基因插入质粒B宿主菌的生物繁殖C质粒的转化D带有目的基因的宿主菌的筛选E目的基因的表达

单选题将一段外源DNA插入到PBR322的BamHI位点,转化后,阳性重组体的筛选标记是()。A氨苄青毒素抗性(Ampr)和四环素抗性(Tetr)BAmpr,TetsCAmps,TetrDAmps,Tets

单选题关于转基因操作的过程,正确的顺序是:() ①目的基因插入Ti质粒的T-DNA中  ②农杆菌侵染植物伤口并进入细胞  ③重组质粒导入到农杆菌,T-DNA插入植物基因组中  ④遗传特性在受体植物中表达A①②④③B①②③④C①③④②D①③②④

单选题载体是能携带目的基因进入宿主细胞,实现外源DNA的无性繁殖,或表达有意义的蛋白质的一类DNA分子,是重组DNA技术中一个重要的工具。人工构建的含有噬菌体DNAcos序列和质粒载体复制子序列的特殊类型的载体称为()A黏粒载体B人工染色体C质粒载体D噬菌体载体E病毒载体

判断题外源基因(或DNA片段)插入到某一基因内的位点后,这个基因不再有任何功能。A对B错

单选题关于多克隆位点描述不正确的是()。A用于插入外源基因的多种DNA限制性内切酶作用位点B该位点既可位于抗性基因区域外,也可位于抗性基因区域内C仅位于质粒载体中D可能位于标记基因的区域内

填空题根据噬菌体的包装能力,将野生型λ噬菌体的基因组DNA改造成插入型载体,该载体的最小分子大小约为()kb,插入的外源片段最大不超过()kb。

问答题某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型,在Kan抗性基因内有一BglI的切点。现用BglI切割该载体进行基因克隆,问:(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?

单选题下列关于质粒pBR322DNA的叙述哪一个是错误的?()A它的分子量较小,易于进入细胞B含有抗四环素(TetR)和抗氨苄青霉素(AmpR)的基因C若用EcoRI切割该质粒,不破坏它的两个抗生素抗性基因D用BamHI限制酶切割pBR322质粒,将破坏它的抗氨苄青霉素基因